2013-08-21
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液相色譜儀常見故障分析及解決要點
既使日常精心維護的液相色譜儀，隨著使用時間的增加或使用者經(jīng)驗不足也會出現(xiàn)一些問題或故障。樣品中溶劑出峰時，使用流動相作樣品的 溶劑;出現(xiàn)進樣閥殘余峰時，使用強溶劑清洗進樣閥，并改進閥和樣品的清洗程序;流動相用水不合格率，應(yīng)使用HPLC級的水。
既使日常精心維護的液相色譜儀，隨著使用時間的增加或使用者經(jīng)驗不足也會出現(xiàn)一些問題或故障。現(xiàn)將液相色譜儀容易出現(xiàn)的故障及解決辦法介紹如下：
1.保留時間變化
保留時間的變化有三中情況：波動、縮短、延長。
保留時間出現(xiàn)波動時，應(yīng)檢查柱溫是否處于恒溫狀態(tài)，如果設(shè)置為室溫，氣溫的變化
會引起保留時間的波動，應(yīng)該設(shè)置為恒定溫度;等度和梯度間還沒有充分達到平衡狀態(tài)時，應(yīng)該用十倍以上柱體積的流動相去平衡色譜柱;緩沖液濃度太低時，應(yīng)換用>25mmol/L的緩沖液;色譜柱被污染或已經(jīng)接近柱壽命時，應(yīng)更換保護柱或換新色譜柱。
保留時間縮短時，流速增加，應(yīng)檢查流速的設(shè)定;柱溫高時，應(yīng)檢查柱的設(shè)置;進樣量太大時，減少樣品用量或降低樣品濃度;流動相的組成發(fā)生了改變，比如流動相中易揮發(fā)有機相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會導(dǎo)致流動相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;流動相的PH值應(yīng)保持3~7.5范圍內(nèi)，否則會引起柱鍵合相的流失。
保留時間延長時，流速減小，應(yīng)檢查流速的設(shè)定和管路是否有泄露;柱溫低時，檢查
柱溫的設(shè)置;流動相的組成發(fā)生了改變，比如流動相中易揮發(fā)有機相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會導(dǎo)致流動相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;檢查流動相的pH值是否3~7.5范圍內(nèi)，否則會引起柱鍵合相的流失。
2.峰拖尾
色譜柱超載時，要減少進樣量或稀釋樣品或使用高溶量的色譜柱;色譜柱性能不佳時，更換色譜柱;死體積或柱外體積過大時，將連接降至zui低，并對所有連接點作合理的調(diào)整，盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接;加入硅羥基，其作用是純化色譜柱，增加緩沖液的濃度，降低流動相的pH值，純化樣品;出現(xiàn)峰干擾時，應(yīng)清潔樣品，調(diào)整流動相。
3.峰展寬
進樣體積過大時，用流動相配樣;樣品過載時，進小濃度、小體積樣品;在進樣閥中
造成峰擴展時，進樣前后排出氣泡，以降低擴散;流動相粘度過高時，提高柱溫，并采用低粘度流動相;等度洗脫，保留時間過長時，要增加流速或改用梯度洗脫;柱外體積過大時，[1]將連接管徑和連結(jié)管降至zui小。
4.基線噪聲
流動相或檢測器中有氣泡時，要對流動相進行脫氣處理;檢測器燈有連續(xù)噪聲時，更
換氘燈;出現(xiàn)由污染引起的隨機噪聲時，應(yīng)清洗色譜柱、凈化樣品、使用HIPLC級試劑;偶然有噪聲時，可能是來自電源的干擾，如果電壓不穩(wěn)時，應(yīng)采用穩(wěn)壓電源。
5.肩峰或分叉
進樣量太大或樣品濃度過高時，要減少進樣量或稀釋樣品;樣品溶劑太強時，應(yīng)使用軟弱的樣品溶劑;色譜柱性能欠佳時，應(yīng)更換色譜柱。
6鬼峰
色譜柱未達到平衡時，要繼續(xù)平衡色譜柱;樣品中溶劑出峰時，使用流動相作樣品的
溶劑;出現(xiàn)進樣閥殘余峰時，使用強溶劑清洗進樣閥，并改進閥和樣品的清洗程序;流動相用水不合格率，應(yīng)使用HPLC級的水。
使用注意事項
在使用混合溶劑作流動相時，一定要先混合，再過0.45um濾膜;等流動相恢復(fù)至室溫，用超聲波或He氣進行脫氣處理后，方可使用。
更換流動相時，必須按一定的程序進行，否則會產(chǎn)生問題。更換流動相有三種情況：互溶性流動相的更換、無互溶性流動相的更換和緩沖溶液的更換。對于*種情況，先用準(zhǔn)備更換的流動相把吸濾器*清洗干凈，再打開儀器的排液閥，按清洗鍵，清洗泵中的流動相。
將吸濾器放入新流動腥中，減慢流速清洗數(shù)分鐘后關(guān)閉排液閥。接下來清洗色譜柱和檢測器檢測池直到基線平穩(wěn)。對于第二種情況，先用與新舊流動相都互溶的中間清洗液（如：異丙醇）清洗，再用新流動相清洗，具體過程與*種情況相同。對于第三情況，應(yīng)先用蒸餾水作為中間清洗液進行清洗，再用新流動相清洗即可。
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關(guān)鍵字：色譜柱 柱溫 液相色譜儀 互溶性 有機相
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